大麻中的啤酒花潛隱類病毒:以 RT-PCR 檢測根部、清除受感染品系,以及東南亞仍未知的問題(下篇)

啤酒花潛隱類病毒(hop latent viroid,HLVd)可以在一個大麻品系裡潛伏好幾年,外觀卻看不出任何症狀。唯一的跡象可能只是效力下降、花苞變小、莖變脆。要確認是否感染,只能靠實驗室檢測。本篇說明該送哪個部位去檢測、RT-PCR 結果代表什麼,以及如何判讀。

本篇也會介紹一項2025年的研究。研究人員嘗試用加熱和組織培養,把類病毒從受感染的品系中清除。成功率因栽培品種 (cultivar) 而異,從100%到0%都有。最後,本篇列出目前沒有發表資料支持的 HLVd 說法,以及這個地區的種植者可以協助解答的問題。

本文為下篇。上篇:https://asiannabis.com/t/1451

先簡單回顧上篇重點。類病毒是一圈裸露的 RNA(遺傳物質),外面沒有蛋白質外殼。在一項2024年的研究中,受感染母株所產的實生苗有84.3%帶有類病毒。把受感染植株的汁液接種到其他植株上,100%都受到感染。濃度約0.8%次氯酸鈉的稀釋漂白水作用2分鐘,就能破壞表面上的類病毒;紫外線、70%酒精和中等程度的加熱都沒有效果。

1. 檢測類病毒:該送哪個部位、如何判讀 RT-PCR 結果

這項檢測測的是什麼

RT-PCR 是「反轉錄聚合酶連鎖反應」(reverse transcription polymerase chain reaction)的縮寫。第一步,實驗室把類病毒的 RNA 轉成對應的 DNA 複本。第二步,實驗室把這段 DNA 中特定的一小段大量複製,讓儀器能夠偵測到。

這項檢測非常靈敏。在一項2024年發表於期刊 Viruses 的研究中(參考文獻1),只要總 RNA 量低至5 pg,就能測出類病毒。一皮克(pg)是一兆分之一公克。RT-qPCR 是這項檢測的另一種版本,還能估算樣本中類病毒 RNA 的含量。

該送哪個部位

送根部。 在一項2025年發表於期刊 Plants 的研究中(參考文獻2),根部在感染後2–3週就呈陽性。葉片要到4–6週後才呈陽性。在扦插繁殖的流程中,這段時間差可能決定你是及早發現感染,還是透過插穗把它擴散出去。如果實驗室要求,也一併附上葉片。

  • 從任何一株母株剪取插穗之前,先檢測這株母株。
  • 使用任何一株供粉株的花粉之前,先檢測這株供粉株。
  • 任何做過清除處理的品系,以及任何新引進的品系,都要再檢測一次。

如何判讀結果

  • 陽性: 實驗室在這份樣本中測到類病毒 RNA。請把這株植株視為已感染。停止從它剪取插穗、採集花粉或種子。它接觸過的工具和工作台都要用漂白水清潔。
  • 陰性: 實驗室在這份樣本、在這個時間點沒有測到類病毒 RNA。剛發生不久的感染可能還沒擴散到採樣的部位,葉片尤其如此。所以根部是比較好的樣本,之後再檢測一次也很有用。在第2節介紹的清除研究中,研究人員會在第一次檢測後約10週再檢測一次,才判定一個品系已經乾淨。
  • RT-qPCR 結果: 請向實驗室問清楚,它如何呈報類病毒的含量,以及陽性和陰性的分界設在哪裡。
  • 工作台或工具的擦拭樣本呈陽性: 代表那個表面上有類病毒 RNA。測得到的 RNA 不一定就能感染植株。不過,仍應把這個表面視為已受汙染,並用漂白水清潔。

把樣本送到實驗室

找一間提供 HLVd 專用 RT-PCR 或 RT-qPCR 檢測的實驗室。採樣之前,先問實驗室三件事:需要多少組織、如何包裝和寄送,以及多久能拿到結果。大學的植物病理學系和農業診斷實驗室都是可以詢問的地方。撰寫本文時,沒有找到在泰國或東南亞經過查證的檢測單位,所以這裡沒有列出任何名稱。

寄送前先確認相關規定。大麻植物材料在泰國和其他地方都受到管制。樣本需要跨境寄送時,這一點尤其重要。

譯者註: 在泰國,依據《公共衛生部公告:管控草藥(大麻),佛曆2568年》,大麻花屬於管控草藥。這份公告自2025年6月26日起生效。只寄送根部和葉片,絕對不要寄花。寄送任何東西之前,先問實驗室需要哪些文件。在30–35 °C 的氣溫下,樣本可能在運送途中變質,所以也要問實驗室運送時是否需要冷藏。

行動建議: 在下一輪剪取插穗之前,聯絡一間實驗室,問清楚上面三個問題。然後寄送母株的根部樣本。

2. 清除受感染品系:分生組織培養加上熱處理

這是什麼方法

這個方法結合了兩種技術。熱療法(thermotherapy) 是把植株放在較高的溫度下維持數週。分生組織培養(meristem culture) 是切下分生組織,也就是枝條頂端那個極小的生長點,再把它放進無菌的實驗室容器中培養成新植株。

資料來自一項2025年發表於期刊 Plant Cell, Tissue and Organ Culture 的研究(參考文獻3)。正式發表的論文涵蓋十三個栽培品種,並指出成功率因品種而異。下方各栽培品種的數據,來自同一項研究在2024年發布的預印本。預印本是論文在經過其他科學家審查之前,先在網路上公開的早期版本。

預印本所描述的步驟

  1. 把組織培養小苗放在 28–30 °C 下維持4–5週。
  2. 切下分生組織,並在 2–3週 內誘發新芽。
  3. 新芽生長約 8週。
  4. 檢測植株。
  5. 約 10週後再檢測一次,確認仍為陰性。

把這些步驟加起來,到第一次檢測大約需要14–16週。要得到一個確認乾淨的品系,大約需要六個月。

栽培品種 清除率(首次檢測)
Valarie 100%
Athena 94%
FRB1.4 69%
AnnaLee 62%
Wife 50%
Hybrid 9 26%
Hybrid 5 14%
EarlyPearly 14%
Abigail 3%
S1-4 2%
River Rock 0%
Pure CBG 0%

存活率: 預印本指出,整體而言有超過70%的小苗撐過了熱處理。目前能取得的版本沒有提供各栽培品種的存活率。

這些結果代表什麼

同一個方法、同一間實驗室,清除率從100%到0%都有。在有呈報清除率的十二個栽培品種中,有四個的清除率只有3%或更低。這些栽培品種大多是北美品系。沒有找到這個地區所種植栽培品種的已發表清除率,所以 你無法查到自己的栽培品種有多少機會成功。

清除品系,還是換掉它?

在這樣的成功率下,首先要決定的是清除這個品系,還是換掉它。如果是一個很有價值、無可取代的品系,花六個月做一次結果不確定的嘗試,可能值得。否則,換成檢測為陰性的種子,或換成同一基因來源、且檢測為陰性的材料,通常比較快。

提供清除服務的實驗室,應該把它當作一次結果不確定的嘗試來定價,而不是保證成功的服務。清除後的小苗不帶類病毒,但並不具有抵抗力。只有上篇介紹的清潔流程,才能讓它們保持乾淨。

熱帶條件。 28–30 °C 的加熱步驟,和泰國許多地區平常的氣溫差不多,所以加熱本身在這裡並不難。難的是在潮濕的氣候中維持組織培養實驗室的無菌狀態,因為黴菌和細菌汙染的風險始終存在。組織培養與微體繁殖主題說明了無菌操作技術。

譯者註: 對種植者來說,這個方法提供了一個機會,讓原本只能丟掉的稀有品系有機會保留下來。撰寫本文時,沒有找到在泰國或東南亞提供大麻品系 HLVd 清除服務的實驗室。如果你找不到,目前實際可行的做法是換成檢測為陰性的種源。在此同時,把受感染的母株隔離,不要再從它繁殖。

譯者註: 如果你或實驗室要嘗試這個方法,請事先規劃停電對策。熱季時一停電,密閉房間可能在幾小時內就超過28–30 °C 的範圍。停電也會讓無菌操作台(clean bench)停止運作。請記錄室溫,並把溫度控制器和無菌操作台接上 UPS(不斷電系統,停電時自動接手供電的電池)。雨季時汙染會更多,請多準備一些小苗,以彌補損失。

行動建議: 依價值列出你所有的品系。針對每個受感染的品系,決定要換掉還是嘗試清除。如果要嘗試,先從單一品系的一小批次開始,在處理前後各檢測一次,並在約10週後再檢測一次。

3. 無法查證的 HLVd 說法

「加州90%的種植場都有啤酒花潛隱類病毒。」 這個數字被廣泛轉述。一篇產業媒體文章引用了超過200,000次組織檢測,還加上一個加拿大診斷機構「大約四分之一的樣本」的數字(參考文獻4)。這篇文章沒有提供正式出處,背後的資料也屬於檢測實驗室所有。類病毒的生物學已有大量發表的研究,但這個醒目的盛行率數字並沒有。

泰國與東南亞的盛行率。 沒有找到這個地區任何已發表的調查、檢測計畫或感染率。沒有資料,並不代表這個病原不存在。

在熱帶高溫下的表現。 沒有找到任何研究探討高氣溫如何影響類病毒在植株內的擴散。有研究發現,類病毒在12小時光照下比在24小時光照下擴散得更快,但這項研究沒有確定原因。

行動建議: 看到任何 HLVd 盛行率數字時,先問它來自哪一項研究。引用參考文獻清單中的研究,而不是新聞稿。不要因為沒有在地資料,就認定你的種植場沒有 HLVd。去檢測。

4. 這裡的種植者可以查明什麼

以下四個問題,可以看出 HLVd 在泰國與東南亞是否構成問題:

  • 這個地區有人檢測過嗎? 只要有少數幾筆來自在地種植場的結果,不論陽性或陰性,都會是最早的在地資料之一。
  • 有沒有人把大麻種在番茄或小黃瓜旁邊,而且兩者共用工具或工人? 2024年針對其他寄主植物的實驗室結果顯示,這件事值得了解,雖然目前還沒有證實會在田間傳播。
  • 有沒有人主要用紫外線消毒箱來消毒工具? 根據2025年的資料,這種做法需要更換,而漂白水是便宜的解決辦法。
  • 有沒有人在本地嘗試過分生組織清除? 只要有一筆結果,不論成功或失敗,並註明栽培品種,就會是這個地區第一筆這類資料。

如果一個品系經過幾代慢慢變差,效力下降、花苞變小、莖變脆,卻看不到任何可以拍照的症狀,請先檢測 HLVd,再去怪肥料或基因。

請在本主題下方貼出你的檢測結果,不論陽性或陰性,並註明送檢的組織部位。 目前沒有找到東南亞 HLVd 感染的任何已發表資料。這個論壇只要累積十幾筆結果,就會是判斷這個病原是否已在這裡出現的最佳資訊之一。

本論壇相關文章:母株與無性繁殖;種子與花粉的保存;製作雌性種子;表現型篩選 (phenohunting);根腐病、腐黴菌(Pythium)與鐮刀菌(Fusarium)。

參考文獻

  1. Atallah OO, Yassin SM, Verchot J. New insights into hop latent viroid detection, infectivity, host range, and transmission. Viruses 2024; 16(1):30. https://doi.org/10.3390/v16010030
  2. Punja ZK, Scott C, Tso HH, Munz J, Buirs L. Transmission, spread, longevity and management of hop latent viroid, a widespread and destructive pathogen affecting cannabis (Cannabis sativa L.) plants in North America. Plants 2025; 14(5):830. https://doi.org/10.3390/plants14050830
  3. Torres A, et al. Differential gene expression analysis of Cannabis sativa following hop latent viroid (HLVd) eradication therapy in micropropagation tissue culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 2025; 161:66. https://doi.org/10.1007/s11240-025-03057-8 ;含各栽培品種數據的預印本:bioRxiv 2024, https://doi.org/10.1101/2024.04.06.588422
  4. MMJ Daily. Hop latent viroid: a global threat to cannabis cultivation. 產業媒體文章;其中的盛行率數字未經查證。https://www.mmjdaily.com/article/9786670/hop-latent-viroid-a-global-threat-to-cannabis-cultivation/

本文是植物栽培的技術資訊,提供給在所在地合法經營的讀者參考。各國對大麻種植的管制方式都不相同。在泰國,大麻花依據公共衛生部的規定屬於管控草藥,販售或加工都需要取得許可。本文內容不構成法律建議,也不是診斷。只有實驗室檢測才能確認這個病原。